产品货号：
GS2287
中文名称：
即用型PCR试剂盒(含染料)
英文名称：
Ready-to-Use PCR Kit(Taq, with Loading Dye)
产品规格：
20T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种即用型的溶液，2×Taq PCR Mastermix(blue dye)含有Taq DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、PCR buffer、PCR稳定剂、凝胶上样缓冲液和蓝色染料(溴酚蓝)，因此PCR产物在PCR结束后可以直接进行琼脂糖凝胶电泳。产品目标是节省建立PCR反应的时间和降低污染的的风险。优化的2×Taq PCR Mastermix能从λDNA扩增长达5kb的片段。用户只需加入模板、水及引物即可建立PCR反应。提供的25mM Mg2+用于重新优化PCR体系，以期获得理想的PCR产物。
| 组分 | 20T | 100T |
| 2×Taq PCR MasterMix(blue dye) | 0.5mL | 5×0.5mL |
| Sterilized ddH2O | 1mL | 5×1mL |
| MgCl2 (25mM) | 0.5mL | 1mL |
保存：-20℃
- 根据以下方案优化模板浓度。
gDNA 1～10μg/mL plasmid DNA 0.1～1μg/mL - 优化引物浓度：0.2～0.5μM的引物浓度适用于大多数PCR扩增反应。
- 试剂于冰上溶解。
- 根据下表准备反应体系：
成分 用量 浓度 2×Taq PCR MasterMix(blue dye) 25μL 1× DNA template 1μL 1～10μg/mL gDNA - 1～1μg/mL pDNA
Primer F (10μM) 2μL 0.4μM Primer R (10μM) 2μL 0.4μM Sterilized ddH2O 至50μL - 1～1μg/mL pDNA
- 将反应管置于离心机中离心30~60 s。
- 如果使用的热循环仪没有热盖功能，用矿物油覆盖反应液。
- 大多数PCR反应可使用下列循环程序：
步骤 温度 时间 循环数 Pre-Duration 94℃ 4min 1 Duration 94℃ 30 s 30～35 Anneal 45～68℃ 30 s Extend 72℃ 1kb/min Post-Extend 72℃ 10min 1
| 问题 | 分析 |
| 产物少或无 | 模板浓度过低；实验样品DNA损伤或降解。 |
| 引物设计不完善。 | |
| 热循环条件未优化；退火温度过低或过高；延伸时间太短；循环次数太少。 | |
| 引物浓度过低；Mg2+浓度未优化。 | |
| 模板质量太差。 | |
| 产物为多条带 | 引物设计不完善。 |
| 引物浓度未优化或降解。 | |
| 退火温度过低。 | |
| PCR循环条件未优化。 | |
| 产物有污染 | 初始模板用量过多。 |
| Mg2+浓度未优化。 | |
| PCR中的长片段来源于长的基因组DNA。 | |
| 携带污染。 | |
| 引物设计不完善。 |
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